脂肪干细胞体外分化为内皮细胞的可行性

• 作者: 刘宏伟 张端珍 朱鲜阳 盖鲁粤
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 内皮/细胞学 细胞分化
• 年，卷（期）: 2005,（34）
• 所属期刊栏目: 成体干细胞生物学特征研究
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 7236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.34.005

摘要

目的:以内皮前体细胞为对照,探讨具有多向分化性能的脂肪干细胞的体外培养和分化为内皮细胞的可能性.方法:①实验于2003-10/2004-02在解放军总医院心内科实验室完成.选用雄性壮年和老年新西兰白兔各3只.②抽取兔髂骨骨髓,Percoll密度梯度离心后取单个核细胞,采用贴壁法以内皮细胞专用培养基(添加体积分数0.2胎牛血清,内皮细胞基本培养基2和辅助因子碱性成纤维细胞生长因子,氢化可的松,血管内皮生长因子,表皮生长因子,胰岛素样生长因子1,抗坏血酸,庆大霉素等)培养扩增内皮前体细胞.③取兔腹部皮下脂肪组织,胰蛋白酶消化提取脂肪干细胞,Iscove改良的Dulbecco培养基培养扩增,将第2代脂肪干细胞传代后,分为2份,分别用内皮细胞专用培养基和Iscove改良的Dulbecco培养基培养2～4周,观察细胞的变化.用乙酰化低密度脂蛋白,Ⅰ型荆豆凝集素和鼠抗Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体鉴定,观察脂肪干细胞是否分化为内皮细胞.结果:①原代内皮前体细胞接种后48 h才能贴壁,生长非常缓慢,呈集落状生长,一般需要10 d左右才能形成较大的集落,达到传代的目的,传代细胞生长迅速.内皮前体细胞必须使用含有多种刺激因子的培养基才能生长.②脂肪干细胞培养无需刺激因子,原代细胞接种12 h后即开始贴壁,继而迅速进入对数生长期,无集落形成,原代和传代细胞均生长迅速.将脂肪干细胞采用内皮细胞专用培养基培养2周后,细胞形态未见明显变化,但与内皮前体细胞一样,大部分细胞采用乙酰化低密度脂蛋白,Ⅰ型荆豆凝集素和鼠抗Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体检测均为阳性;培养3周后细胞的贴壁习性改变,几乎所用细胞均为阳性,而采用Iscove改良的Dulbecco培养基培养的脂肪干细胞采用上述检测均为阴性.③壮年兔骨髓中内皮前体细胞含量较高,培养后能保持旺盛的分裂能力;老年兔骨髓中内皮前体细胞含量明显减少,有的老年动物骨髓甚至难以培养出内皮前体细胞,而且培养时细胞容易老化,表现为细胞体积增大,形态呈扁平状或不规则,细胞浆增多而核变小.壮年兔和老年兔脂肪干细胞在生长速度和细胞形态方面没有明显差别.结论:①脂肪干细胞培养远比内皮前体细胞简单,它不需要多种细胞因子刺激即可生长.②脂肪干细胞在使用内皮细胞专用培养基诱导后可快速分化为内皮细胞.③脂肪组织中有大量的脂肪干细胞,其体外增长和分化能力受年龄影响较小,而骨髓中内皮前体细胞含量和扩增性能受年龄影响较大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张端珍	解放军沈阳军区总医院先心病内科	8	40	4.0	6.0
2	盖鲁粤	解放军总医院心内科	196	994	16.0	22.0
3	刘宏伟	解放军总医院心内科	43	383	11.0	17.0
4	朱鲜阳	解放军沈阳军区总医院先心病内科	11	86	4.0	9.0