摘要:
目的:观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量、凋亡细胞数量变化、脑组织匀浆一氧化氮含量、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性改变的影响.方法:实验于2003-03/2004-12在解放军第三军医大学附属新桥医院中心实验室完成.选择健康Wistar大鼠66只,随机分为正常对照组6只,缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组),缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组).除正常对照组线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,缺血2 h后再灌注.促红细胞生成素组于再灌注开始时经腹腔按2 000 U/kg注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200 U/mL),生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水.再灌注后观察时相点为2,6,12,24,48 h,每个时间点6只.应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况,应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况,应用硝酸还原酶法测定脑组织一氧化氮含量,羟胺法测定脑组织超氧化物歧化酶活性,硫代巴比妥酸法测定脑组织中丙二醛含量.结果:66只大鼠全部进入结果分析.①脑海马CA1区细胞计数:促红细胞生成素治疗组再灌注后12,24,48 h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286.7±33.8),(268.6±44.5)个/视野;(271.9±30.4),(240.8±22.5)个/视野;(258.3±29.5),(201.8±30.7)个/视野;(t=3.189~5.589,P<0.01)].②脑海马CA1区凋亡细胞计数:促红细胞生成素治疗组再灌注后6,12,24,48 h比生理盐水对照组阳性细胞数明显减少[(21.5±5.8),(28.4±6.5)个/视野;(32.7±4.6),(48.8±7.6)个/视野;(42.8±6.6),(60.7±10 2)个/视野;(51.8±9.5)个/视野,(81.6±12.3)个/视野,(t=3.457~6.347,P<0.01)].③脑组织一氧化氮含量:促红细胞生成素治疗组再灌注后2,6,12,24,48 h比生理盐水对照组一氧化氮含量明显降低[(48.2±5.1),(59.4±5.5)mmol/L;(51.4±6.3),(66.3±9.8)mmol/L;(59.7 ±6.6),(80.7±10.2)mmol/L;(55.7±8.1),(77.8 ±9.2)mmol/L;(49.3±6.7),(67.3±7.1)mmol/L,(t=3.258~5.624,P<0.01)].④脑组织超氧化物歧化酶活性:促红细胞生成素治疗组再灌注后2,6,12,24,48 h比生理盐水对照组超氧化物歧化酶活性明显增高[(3.78±0.74),(3 21±0.31)μkat/L;(3.41±0.43).(2 92±0.31)μkat/L;(3.21±0.35),(2.51±0.27)μkat/L;(3.64±0.55),(3.01±0.32)μkat/L;(4.10±0.56),(3.55±0.41)μkat/L,(t=3.485~6.457,P<0.01)].⑤脑组织丙二醛含量:促红细胞生成素治疗组再灌注后2,6,12,24,48 h比生理盐水对照组丙二醛含量明显降低[(40.7±4.4),(54.6±6.7)μmol/L;(51.3±5.4),(65.7±8.8)μmol/L;(61.7±7.2),(77.4±7.5)μmol/L;(53.8±6.4),(67.8±9.1)μmol/L;(39.7±4.0),(53.3±4.9)μmol/L,(t=3.541~6.045,P<0.01)].结论:促红细胞生成素可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量,对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用,降低一氧化氮生成量,使脂质过氧化反应的程度减轻,起到了对神经细胞的保护作用.