淀粉样前体蛋白过度表达细胞模型的建立及对细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 傅松滨 安丽荣 张际绯 赵育桢 金连弘
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 PC12细胞 转染 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2005,（17）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 100-102
• 页数: 4页
• 分类号: R74
• 字数: 5317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.17.063

摘要

目的:建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型,并观察其对PC12细胞形态及细胞增殖的影响和在氧化应激损伤时,对细胞生长及凋亡的影响.方法:实验于2003-09/2004-12在哈尔滨医科大学遗传与细胞生物学教研室完成.用脂质体转染对数生长期的PC12细胞,细胞分为3组:转染真核表达载体的正常对照组;淀粉样前体蛋白过度表达组;642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组,建立稳定表达的细胞株.用Western印迹法验证转染效果.使用细胞形态学方法、四甲基氮唑兰法观察对细胞形态和生长的影响;使用四甲基氮唑兰法、Hoechst33342观察在无血清培养24 h后,100 μmol/L过氧化氢作用4 h对PC12细胞(经神经生长因子处理分化为交感神经元样细胞而接近于神经元)的影响.结果:①Western印迹法结果:转染真核表达载体的正常对照组无人的淀粉样前体蛋白表达,而淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组有人的淀粉样前体蛋白表达,说明转染成功.②野生型淀粉样前体蛋白和突变型642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组基因转染PC12细胞后,与转染真核表达载体的正常对照组相比细胞形态及细胞突起的数量和长度无明显改变.③四甲基氮唑兰法测定结果:淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞生长速度略低于转染真核表达载体的正常对照组,但无明显差异.四甲基氮唑兰法证实无血清培养24 h后氧化应激损伤,与转染真核表达载体的正常对照组的细胞抑制率(24.3%)比较,淀粉样前体蛋白过度表达组抑制率(47.5%)和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞抑制率(46.3%)明显增加.④Hoechst33342染色结果:无血清培养24 h后氧化应激损伤,3组细胞都发生凋亡;与转染真核表达载体的正常对照组凋亡率(19±1.5)%相比,淀粉样前体蛋白过度表达组的凋亡率[(33±3.5)%]和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组细胞凋亡率[(33.5±6)%]都明显增加(P＜0.01).结论:成功的建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型,过渡表达的淀粉样前体蛋白对PC12细胞形态及增值速度无明显影响;而在氧化应激损伤时,对其生长及凋亡有显著影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅松滨	哈尔滨医科大学遗传教研室	206	912	13.0	19.0
2	金连弘	哈尔滨医科大学组胚教研室	59	263	8.0	12.0
3	安丽荣	哈尔滨医科大学组胚教研室	6	36	4.0	6.0
4	赵育桢	哈尔滨医科大学遗传教研室	14	45	5.0	6.0
5	张际绯	哈尔滨医科大学组胚教研室	2	1	1.0	1.0