大口黑鲈肝细胞原代培养方法的建立

• 作者: 唐俊 喻文娟 张宁 杨先乐 郑宗林
• 来源期刊: 上海水产大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大口黑鲈 肝细胞 原代培养
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 页码范围: 430-435
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 4090字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7271.2006.04.009

摘要

取材大口黑鲈肝脏组织,培养其原代细胞,比较研究了组织块法和酶消化法两种培养方法及不同的培养条件,以确定其最佳培养方法和条件,同时观察了长期培养过程中肝细胞的形态变化.结果表明:组织块方法不适于大口黑鲈肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出.而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果.胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间20min,分步收集肝细胞,经台盼蓝检测和血球计数板计数,平均活力＞90%,每克肝重可获得3×106个分离肝细胞.在细胞活力和数量两方面达到最佳平衡.在含20%胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199/L15培养基中,于4%CO2,28℃培养箱中长期培养并传代.