NT4-p53(N15)-Ant融合基因重组腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 宋丽萍 李跃萍 杨广笑 王全颖 邱曙东
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NT4-p53(N15)-Ant 重组腺病毒 肿瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 214-218
• 页数: 5页
• 分类号: R73-3
• 字数: 3199字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2006.03.013

摘要

目的:构建编码融合基因NT4-p53(N15)-Ant的重组腺病毒表达载体,为进一步基因治疗的实验研究奠定基础.方法:利用PCR体系延伸互为模板的引物,通过T载体克隆法获得p53(N15)-Ant基因克隆,酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N15)-Ant亚克隆至腺病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒PJM17共同转染HEK-293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒Ad.NT4-p53(N15)-Ant,收集病毒上清,大量扩增并测定其滴度,用RT-PCR检测目的基因在293细胞的表达情况.MTT比色法观察重组病毒对HepG2细胞存活率的影响.结果:克隆出p53(N15)-Ant基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的(1×1011 pfu/ml)重组腺病毒表达载体;反转录聚合酶链反应证实感染Ad.NT4-p53(N15)-Ant的293细胞中有目的基因的表达.Ad.NT4-p53(N15)-Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤作用,与Ad.GFP比较,NT4 p53(N15)Ant重组腺病毒处理组HepG2细胞的存活率明显降低.结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-p53(N15)-Ant复制缺陷型重组腺病毒,为下一步的肿瘤基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王全颖		62	151	5.0	8.0
2	宋丽萍	西安交通大学第一附属医院放疗科	35	258	8.0	14.0
3	杨广笑		67	148	5.0	7.0
4	邱曙东	西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系	55	591	12.0	22.0
5	李跃萍	西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系	5	69	3.0	5.0