介导p73去阻抑肽表达的重组腺伴病毒的构建和鉴定

• 作者: 杨广笑 王全颖 白艳霞 闫利英 马清涌
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: NT4-p53(N37)-HA2-TAT p53(N37) p73 重组腺伴病毒 恶性肿瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 180-184,189
• 分类号: R73.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.02.013

摘要

目的 构建编码融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT的重组腺伴病毒表达载体,为恶性肿瘤基因治疗的实验研究奠定基础.方法 采用互补引物二次PCR法以及T载体克隆法获得p53(N37)基因克隆,酶切后将其连同穿膜肽HA2-TAT片段一起连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT亚克隆至腺伴病毒的穿梭质粒pSSHG-CMV中,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并进行酶切鉴定;应用磷酸钙沉淀法,pSSHCCMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT、辅助质粒pAAV-Ad,腺病毒全基因组质粒pFG140三种质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并用斑点杂交法测定重组病毒的滴度;MTT比色法、流式细胞仪观察重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT对HepG2细胞的抑制作用.结果 克隆出p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的(2×1013pfu/L)重组腺伴病毒表达载体并对HepG2细胞有明显的抑制作用,且这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的.结论 通过分子克隆体外重组技术成功制备了rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT复制缺陷型重组腺伴病毒,为下一步开展在p53突变或缺失肿瘤中针对p73的靶向性肿瘤基因治疗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫利英	西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科	25	88	5.0	8.0
2	白艳霞	西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科	40	146	7.0	10.0
3	马清涌	西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科	155	811	14.0	17.0
4	王全颖		62	151	5.0	8.0
5	杨广笑		67	148	5.0	7.0