表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 陈廷炜 孟宪踊 王铁成 高玉伟 冯娜 夏咸柱
• 来源期刊: 野生动物学报
• 关键词: 犬瘟热病毒 H基因 复制缺陷型重组腺病毒 大熊猫源
• 年，卷（期）: 2023,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文|ORIGINAL PAPERS
• 页码范围: 747-754
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-0127.2021.03.013

摘要

为构建能够表达大熊猫源犬瘟热病毒(CDV)分离株giant panda/SX/2014 H蛋白的复制缺陷型重组腺病毒,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增株giant panda/SX/2014 H基因,通过TOPO连接克隆至入门载体pENTR/D-TOPO,得到重组入门质粒pENTR/D-TOPO-CDV-H,然后与腺病毒骨架载体pAd/CMV/V5-DEST进行LR重组,获得重组质粒pAd-CDV-H;重组质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,获得重组腺病毒rAd-CDV-H,连续传代后对获得的重组腺病毒分别进行病毒滴定、免疫荧光和Western blot鉴定.经免疫荧光方法及Western blot鉴定结果表明,重组腺病毒rAd-CDV-H感染293A细胞、Vero细胞后均可以成功表达H蛋白,获得的重组腺病毒的滴度高达1010 IFU/mL.成功获得能够表达大熊猫源CDV H蛋白的重组腺病毒rAd-CDV-H,在进一步证明其安全有效后,可为大熊猫犬瘟热免疫预防提供候选疫苗株.