人TSHR A亚单位重组腺相关病毒2/9载体的构建及鉴定

• 作者: 伍丽萍 何明倩 张萌 施秉银 王悦 胡诗倩 赵凤仪
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 促甲状腺素受体A亚单位 重组腺相关病毒 格雷夫斯病
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法研究
• 页码范围: 997-1001
• 页数: 5页
• 分类号: R581.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201906030

摘要

目的 构建人促甲状腺素受体(TSHR)A亚单位重组腺相关病毒2/9杂合载体(rAAV2-9-hTSHR289-IRES-ZsGreen),为研究格雷夫斯病建立理想动物模型和探索基因预防提供更佳手段.方法 以EcoRⅠ和BamHⅠ将腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen和含hTSHR289的pDC315质粒双酶切,回收酶切病毒骨架质粒及目的片段进行连接,产物转化JM109感受态细菌,获取重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen.经酶切电泳、测序鉴定后,将pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen、辅助质粒pHelper、包装质粒pAAV-2/9(AAV2-Rep,AAV9-Cap)采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获取大量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen,经纯化后荧光显微镜下观察其包装效率,rQ-PCR法测定病毒滴度.将rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染HEK293细胞,ELISA法检测不同时间点hTSHR289蛋白表达水平.结果 重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;荧光显微镜下观察显示转染293AAV细胞72 h,病毒包装效率达92％～94％,rQ-PCR法测定的rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen病毒滴度为1×1013 vg/mL;ELISA法显示rAAV2/9介导的hTSHR289蛋白表达96 h明显高于72 h及48 h.结论 成功构建rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen重组腺相关病毒载体并能有效转染和表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施秉银	西安交通大学第一附属医院内分泌科	208	1277	17.0	27.0
2	张萌	西安交通大学第一附属医院内分泌科	34	288	6.0	16.0
3	伍丽萍	西安交通大学第一附属医院内分泌科	12	25	3.0	4.0
4	赵凤仪	西安交通大学第一附属医院内分泌科	3	1	1.0	1.0
5	何明倩	西安交通大学第一附属医院内分泌科	2	3	1.0	1.0
6	王悦	西安交通大学第一附属医院内分泌科	15	39	4.0	6.0
7	胡诗倩	西安交通大学第一附属医院内分泌科	1	1	1.0	1.0