可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体基因的克隆和原核表达

• 作者: 岑洪 林茂芳 蔡真 黄河
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,可溶性巨噬细胞集落刺激因子 克隆 原核表达 pET-28a(+) 蛋白质复性
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 412-414
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 2968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.02.051

摘要

目的:克隆可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体(sMR)基因,在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得活性蛋白.方法:从人骨髓细胞中提取总RNA,在sMR基因引物两端分别加上NdeⅠ和BamHⅠ酶切位点,利用RT-PCR技术扩增sMR基因,经NdeⅠ和BamHⅠ酶切后连接到表达载体pET28a,测序证实克隆基因的正确性,并在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,采用his-tag纯化柱纯化目的蛋白,并经复性处理,配体结合实验证实蛋白活性.结果:限制性内切酶切出了预期条带,测序证实了克隆基因的正确性,sMR经诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,表达蛋白经纯化和复性处理,获得了具有活性的功能蛋白.结论:成功克隆与表达了sMR基因,得到了具有活性的功能蛋白,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林茂芳	浙江大学医学院第一附属医院血液科骨髓移植中心	98	560	13.0	18.0
2	黄河	浙江大学医学院第一附属医院血液科骨髓移植中心	92	350	10.0	14.0
3	蔡真	浙江大学医学院第一附属医院血液科骨髓移植中心	40	190	8.0	12.0