猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(pGM-CSF)基因的克隆与原核表达

• 作者: 文心田 曹三杰 杨恒 黄小波
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因克隆 原核表达 生物活性测定
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 206-211
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 5386字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2009.02.005

摘要

通过RT-PCR方法,从经ConA刺激的猪外周血淋巴细胞中扩增出猪粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(pGM-CSF)编码区的cDNA并将其克隆至pMD-19T载体,序列测定表明pGM-CSF基因的长度为435 bp,编码144个氨基酸.通过PCR方法获得缺失其N端17个氨基酸残基信号肽序列的成熟pGM-CSF蛋白基因.将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-GM并转入大肠杆菌(Escherichia coil)BL21(DE3)中进行诱导表达.经SDS-PAGE电泳和Western blot分析表明.表达的重组蛋白分子量约31 kD,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30.4%.采用Ni2+-NTA亲和层析柱对经稀释复性的重组蛋白进行纯化,并采用MTT法以TF-1细胞检测纯化产物的生物学活性.结果表明,重组蛋白可有效刺激TF-1细胞增殖.其活性达到3.43×105 IU/mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田	四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室	100	612	14.0	19.0
2	曹三杰	四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室	89	524	12.0	17.0
3	黄小波	四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室	52	188	9.0	11.0
4	杨恒	四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室	5	12	3.0	3.0