稳定转染pGM-CSF基因的哺乳动物细胞系的建立

• 作者: 华娟 占才耀 向敏 夏瑜 王莲芳 钱运国 陈志华 陶弼菲 高其双
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 哺乳动物细胞 稳定转染 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 6-8,12
• 页数: 4页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文

摘要

构建稳定表达猪pGM-CSF基因的细胞系可以为工业化生产猪pGM-CSF并将其应用于新型兽药的开发提供生产细胞源.本试验用脂质体介导法将真核表达载体plRES2-EGFP-pGM-CSF瞬时转染BHK-21细胞,通过不同浓度的G418加压筛选和进一步采用单个克隆法筛选,建立稳定转染且高效表达pGM-CSF的BHK-21细胞株9个,采用Elisa方法测定稳定转染pGM-CSF的BHK-21细胞株细胞培养上清液中pGM-CSF的表达水平达到329.37士13.76 ng/mL.为下一步从细胞培养物中大量提取目的蛋白并最终开发出一种用于提高动物疫苗免疫效力的新型生物制剂奠定基础.