巯基耗竭剂DEM对内皮细胞NO通路的影响

• 作者: 孙静 张敬各 彭克军 王树人 王秋林 韩晓群
• 来源期刊: 四川生理科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 马来酸二乙酯(DEM) 二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH) 一氧化氮 氧化应激
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: R33
• 字数: 5249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-3885.2006.01.003

摘要

目的:通过DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影响,探讨内皮细胞NO通路功能障碍的可能机制及其在动脉粥样硬化发病中的作用.方法:在内皮细胞培养中加入不同浓度DEM、作用不同时间,以求出能明显降低细胞内GSH浓度、但却不明显影响细胞存活率的最适DEM剂量和时间.以最适DEM剂量和时间顸处理内皮细胞后,继续培养24小时,检测各时间段的GSH含量、DDAH活性及NO产量.细胞存活率检测用MTT法;细胞内GSH含量用荧光测定法;DDAH活性用酶反应后分光光度法检测L-瓜氨酸的生成量;用NO试剂盒检测上清液中NO含量.结果:MTT结果显示DEM最佳的作用浓度为0.6umol/L,时间为半小时,该浓度DEM处理内皮细胞30分钟后,GSH含量已明显降低,但内皮细胞生存率仅比对照组轻微下降,未明显影响细胞存活率;GSH浓度的检测显示,经DEM预处理后半小时细胞内GSH含量已较对照组明显降低(降低28.7%,p＜0.05),随后逐步回升,12小时反超正常水平,随后回落,至24小时时恢复至正常水平;DDAH活性的检测显示,经DEM预处理后DDAH活性随之降低,至2小时时达最低值(降低80.07%,p＜0.01),以后DDAH活性逐渐恢复,24小时后亦出现反超,呈类似于GSH改变的趋势,但时间略滞后;培养液中NO含量在DEM预处理后持续下降,同样于2小时时达最低水平,随后逐步回升,变化趋势与DDAH基本相似.上述三者相似的变化规律提示,DDAH酶活性中心-SH受损可能是内皮细胞NO通路功能障碍的重要机制.结论:氧化应激造成NO系统功能障碍的机制可能与DDAH巯基的损伤密切相关.提示保护DDAH的巯基、修复巯基损伤应是对抗各种NO通路损伤因素、包括氧化应激损伤的重要途经之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王树人	四川大学华西基础与法医学院病理生理学教研室	108	835	14.0	23.0
2	孙静	四川大学华西基础与法医学院病理生理学教研室	32	92	6.0	8.0
3	王秋林	成都医学院第一附属医院内一科	54	429	10.0	19.0
4	张敬各	四川大学华西基础与法医学院病理生理学教研室	9	96	6.0	9.0
5	韩晓群	四川大学华西基础与法医学院病理生理学教研室	5	38	4.0	5.0
6	彭克军	四川大学华西基础与法医学院病理生理学教研室	7	60	4.0	7.0