甜菜黑色焦枯病毒外壳蛋白与病毒致病性的关系

• 作者: 于嘉林 原雪峰 曹云鹤 李大伟 王晓星 蔡祝南 郭立华 韩成贵
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 甜菜黑色焦枯病 侵染性cDNA克隆 外壳蛋白 致病性
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 127-134
• 页数: 8页
• 分类号: Q939.46
• 字数: 5519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2006.02.004

摘要

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7 RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodium amaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSV CP基因的5'端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.