一种改良方法克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株的大片段基因

• 作者: 唐青 崔晓英 杨红彦 毕烨 纪绍忠 蒋盛军 阚飙 高守一
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 新的成人腹泻轮状病毒 J19株 基因 克隆 抑制性引物
• 年，卷（期）: 2006,（9）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 781-785
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.09.003

摘要

目的 扩增、克隆新的成人腹泻轮状病毒J19株的大片段基因.方法 以新成人腹泻轮状病毒J19株的病毒核酸为材料,利用非依赖核酸序列的单引物扩增方法,扩增新的成人腹泻轮状病毒J19株的第5～11基因;根据第5～11基因序列设计7对抑制性引物,通过在PCR扩增体系中添加小片段基因的抑制性引物来提高大片段基因的PCR产量.结果 当在PCR反应体系中添加2对抑制性引物时,大于2kb的大片段基因的PCR产量得到显著提高.将扩增的基因片段克隆至pMD18-T后进行测序,最后得到J19株第2、3、4基因的全长cDNA克隆.结论 这种改良的非依赖核酸序列的单引物扩增方法可以用于对轮状病毒大片段基因的扩增和克隆.