短发夹RNA对头颈肿瘤细胞端粒酶活性和增殖的影响

• 作者: 段洪刚 肖伯奎 陈始明 陶泽璋
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 端粒酶逆转录酶 短发夹RNA 头颈肿瘤 基因治疗
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 283-286,插页4
• 页数: 5页
• 分类号: R739.6
• 字数: 2770字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8852.2006.03.003

摘要

目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的短发夹RNA(shRNA)对喉癌Hep-2细胞株和鼻咽癌NEC细胞株端粒酶活性和生长增殖影响,探讨抑制端粒酶活性途径治疗头颈肿瘤的可行性.方法:根据hTERT cDNA序列构建表达shRNA、含荧光素基因、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒shRNA1和表达shRNA的、含荧光素基因的、靶向非人类基因的真核表达质粒shRNA2.分别以质粒shRNA1、shRNA2、转染试剂及空白培养液处理体外培养的Hep-2细胞和NEC细胞.转染48 h后以TRAP PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性并行HE染色;倒置显微镜下每天观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖活性.结果:① Hep-2细胞和NEC细胞shRNA1处理48 h后与空白对照组比较端粒酶活性下降, P＜0.05.② HE染色发现shRNA1处理后Hep-2和NEC细胞胞体缩小、核固缩,同等培养条件下,细胞生长密度变稀,见许多圆形死亡细胞.③与相应时间点空白对照组细胞平均吸光度(A)值比较,shRNA1处理组Hep-2细胞和NEC细胞24, 48, 72 h A值均减小,P＜0.05.结论:靶向hTERT mRNA的小干扰RNA能够显著降低Hep-2细胞和NEC细胞的端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖,并诱导细胞凋亡.