转染Cx43cDNA对胶质瘤细胞生长影响的观察

• 作者: 何安慰 卢明巍 孙华 洪涛 蒋丽萍
• 来源期刊: 中国神经肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质瘤 缝隙连接细胞间通讯 连接蛋白43
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 134-138
• 页数: 5页
• 分类号: R739.41
• 语种: 中文

摘要

背景与目的:缝隙连接与肿瘤的发生、发展、转移和凋亡密切相关.本研究观察转染Cx43cDNA对C6细胞缝隙连接细胞间通讯功能(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能及生长影响情况.方法:①通过氯化钙法将质粒转入JM109菌株,筛选阳性菌落扩增,用Wizard PureFection质粒DNA纯化系统试剂盒进行提取及纯化,最后用Ecor Ⅰ、Hind Ⅲ内切酶进行酶切鉴定;②基因转染:通过LipofectAMINE2000介导对C6细胞进行质粒DNA转染,用G418筛选浓度筛选出转染成功细胞;③用半定量RT-PCR检测转染后C6细胞Cx43mRNA表达的改变;④划痕荷载染料传输实验(scrape loading dye transfer test,SLDT)检测转染前后GJIC的改变;⑤以MTT法检测转染细胞培养72h后的A值,观察转染Cx43cDNA对C6细胞生长抑制情况;⑥用流式细胞仪技术检测转染细胞培养72h后细胞凋亡率,观察转染Cx43cDNA对C6细胞凋亡的影响.结果:①转染了Cx43cDNA的C6-Cx43细胞Cx43mRNA表达显著增加;②C6-Cx43细胞染料传输能力较空载质粒转染细胞C6-Non明显增强;③MTT法检测表明同C6-Non相比,C6-Cx43细胞A值较低,两者差异有显著性(P＜0.01);④流式细胞仪检测发现C6-Cx43与C6-Non细胞凋亡率无显著性差异(P＞0.05).结论:①转染Cx43cDNA可上调C6细胞GJIC水平.②转染Cx43cDNA可显著抑制C6细胞生长,但细胞凋亡并未增加.