亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选

• 作者: 夏宁邵 张军 李利峰 王明桥 王晋 罗文新 袁权 陈瑛炜
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 固定化金属亲和层析 液相筛选
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 44-49
• 页数: 6页
• 分类号: R373|Q78
• 字数: 5661字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2006.01.008

摘要

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法.将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选.整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用.将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体.