目的 添加转化生长因子-β1(TGF-β1)以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养,定向诱导胚胎干细胞(ESCs)分化,探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用.方法 将ESCs悬浮培养形成2~3 d类胚体(EBs),再向培养液内添加TGF-β1,或(和)将2~3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养.自然分化为对照组.免疫荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(α-actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.结果 向培养液添加TGF-β1或将2~3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养,各自有(43±2.08)%(P<0.01),(69±3.61)%(P<0.01),(65±3.06)%(P<0.01)的EBs出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT,观察到心肌样超微结构.自然分化组发生自发节律性收缩的EBs只有(12±1.53)%,尤其是联合使用两种诱导方法,自发性收缩的EBs高达(91±1.52)%(P<0.01),收缩区域较单一诱导组大,且细胞形态较单一.结论 联合使用化学诱导和共培养2种诱导法对ESCs的心肌细胞定向分化有协同作用.