克隆猪主要组织相容性复合体Ⅱ类DR基因座α链和β链及其体外复合体的构建

• 作者: 夏春 方勤美 李云岗 李新生 王慧飞 王磊 郝慧芳 高凤山
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 主要组织相容性复合体 基因座 二级结构
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 21-26
• 页数: 6页
• 分类号: Q518.1|S858.28
• 字数: 4909字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2006.03.003

摘要

为推动猪主要组织相容性复合体(MHC)空间构象的研究,体外构建了猪的MHC-Ⅱ类蛋白复合体(SLA-Ⅱ).首先克隆长白-达兰杂交商品猪DRA和DRB基因,用富含甘氨酸-丝氨酸的Linker(G4S)3连接DRA和DRB的胞外区,用SOE-PCR得到复合体基因DRA-linker-DRB,插入原核表达载体进行表达;对表达的融合蛋白进行Western-blot鉴定、纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化.对分离的目的蛋白、融合蛋白及麦芽糖结合蛋白(MBP)进行二级结构测定.得到83.4 ku的可溶性融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DRB,其Western杂交带与表达条带大小一致.切割分离后的目的蛋白大小为40.9 ku.目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB二级图谱显示该蛋白呈典型a-螺旋结构,各二级结构元件α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲的氨基酸数目分别为80、121、101和80,融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DR与目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB的二级结构各元件的符合率分别达到了95%、96.7%、91.1%和93.0%.结果分析表明得到的复合体构象正确,可用于进一步的B细胞抗原表位的筛选等结构和功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李新生	中国农业大学动物医学院	20	169	8.0	12.0
2	夏春		68	1187	22.0	31.0
3	王磊	中国农业大学动物医学院	169	1864	23.0	36.0
4	高凤山	中国农业大学动物医学院	60	358	10.0	16.0
6	李云岗	中国农业大学动物医学院	10	57	5.0	7.0
9	郝慧芳	中国农业大学动物医学院	7	31	4.0	5.0
10	王慧飞	中国人民武装警察部队学院消防工程系	24	64	5.0	7.0
11	方勤美	中国农业大学动物医学院	3	32	3.0	3.0