重叠延伸PCR法体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ

• 作者: 夏春 方勤美 李云岗 李新生 郝惠芳 闫若潜 陈红英 高风山
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ) 重链 轻链 重叠延伸PCR
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1047-1052
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4|R392.13
• 字数: 4521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2006.10.018

摘要

本研究旨在体外重建鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHC Ⅰ)重链(α链)胞外区与轻链(β2m)成熟肽的重组嵌合分子.采用RT-PCR法分别扩增鸡MHC Ⅰ的重链胞外区和轻链的成熟肽序列;采用重叠延伸PCR(Splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把通过45个碱基的链连接的鸡MHC Ⅰ重链胞外区基因和轻链成熟肽基因重组到可溶性表达质粒pMAL-p2X进行可溶性表达.经琼脂糖凝胶电泳证明RT-PCR可分别扩增出鸡MHC Ⅰα链胞外区基因和β2m成熟肽基因,大小符合预期.采用MHC Ⅰα链胞外区序列的反义引物与β2m成熟肽基因正义引物有15个碱基重叠的两对引物,以MHC Ⅰα链胞外区序列与p2m成熟肽序列PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸获得了预期大小的连接片段;测序显示重组质粒上MHC Ⅰα链胞外区序列与轻链β2m成熟肽基因的靶序列由一柔性的linker相连,阅读框正确且无移码.本研究表明SOE-PCR是体外重构鸡MHC Ⅰ的一种简捷可行方法.