实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌方法的建立

• 作者: 廖秀云 徐海聂 杨建允 杨素 沙才华 罗宝正 薄清如 陈竞帆
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 实时荧光PCR Ⅱ型猪链球菌
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 783-787
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3244字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.05.028

摘要

建立了一种检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)的实时荧光PCR(real-time fluorescence polymerase chain reaction)方法.用Primer Express2.0和Oligo6.0设计针对Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原基因簇中cps2I基因的引物和Taqman荧光探针.通过常规PCR方法扩增得到81 bp DNA片段,克隆到pMD18-T载体,测序表明得到的序列为目的基因片段.在Lightcycler荧光PCR仪上对Ⅱ型猪链球菌的扩增曲线表明,该实时荧光PCR具有良好的特异性,可成功地扩增Ⅱ型猪链球菌,而参考猪链球菌(S.suis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、志贺氏菌(Shigella)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytoge)和空白对照都是阴性;该检测方法可达到检测10个细菌的灵敏度,反应过程仅需30min完成;在两个不同时间检测同一浓度的菌液,每次做20个重复,2次检测所得的Ct(threshold,阈循环)值之间无统计学差异(P＞0.05),方法稳定性好.该实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薄清如		25	149	7.0	10.0
2	杨素		17	119	6.0	10.0
3	沙才华		17	41	4.0	5.0
4	廖秀云		17	61	5.0	7.0
5	徐海聂		17	92	6.0	8.0
6	罗宝正		15	45	5.0	6.0
7	陈竞帆	华南农业大学生命科学学院	3	19	3.0	3.0
8	杨建允		1	8	1.0	1.0