沉默dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响

• 作者: 张秉强 王丕龙 陈道荣 黄爱龙
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: dnmt1基因 RNA干扰 胃肿瘤 AGS细胞 细胞周期 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 308-314
• 页数: 7页
• 分类号: R734
• 字数: 5640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2006.03.010

摘要

背景与目的:DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,dnmt1)基因在多种肿瘤细胞中表达量相当高,而在正常成人细胞中则低表达,因此dnmt1基因的高表达与肿瘤的发生有密切的关系.本研究观察以dnmt1基因为靶基因的重组质粒对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响.方法:设计短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸片段,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体pshRNA-dnmt1,转染胃癌细胞株AGS.实验分为空白对照组(仅予脂质体)、pTZU6+1组(予空质粒pTZU6+1)和pshRNA-dnmt1组(予以重组质粒pshRNA-dnmt1)3组.Western blot检测dnmt1蛋白水平变化;RT-PCR法评估mRNA水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;吖啶橙/溴乙锭双染色(AO/EB)法、电镜和TUNEL观察细胞凋亡情况.结果:成功构建重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确认.pshRNA-dnmt1转染AGS细胞后24 h出现dnmt1蛋白表达量减少,24、48、72 h抑制率分别为28.24%、68.54%、81.47%.转染pshRNA-dnmt1后24、48、72 h对AGS细胞中dnmt1 mRNA的抑制率分别为21.63%、52.97%、72.06%.转染后72 h S期细胞由空白对照组的(36.58±1.76)%降至pshRNA-dnmt1组的(18.54±6.59)%;G2/M期细胞由空白对照组的(6.18±0.32)%升至pshRNA-dnmt1组的(18.53±1.42)%,均有显著性差异(P＜0.05).转染后24、48、72 h细胞存活率分别为79.49%、51.63%和39.16%.AO/EB法、电镜和TUNEL均可见大量典型的凋亡和坏死细胞.结论:重组质粒pshRNA-dnmt1能特异有效地抑制AGS细胞内dnmt1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丕龙	重庆医科大学附属第一医院消化内科	151	971	16.0	24.0
2	张秉强	重庆医科大学病毒性肝炎研究所	38	295	9.0	16.0
3	黄爱龙	重庆医科大学病毒性肝炎研究所	236	1190	16.0	23.0
4	陈道荣	重庆医科大学附属第一医院消化内科	36	235	9.0	14.0