hTERT启动子的克隆及其在端粒酶阳性肺癌细胞中的靶向转录活性研究

• 作者: 周清华 唐小军 孙芝琳 朱大兴 王艳萍 车国卫 陈晓禾
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人端粒酶催化亚单位 启动子 靶向转录 肺癌
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 497-501
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4210字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2006.04.001

摘要

目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子序列片段,并探讨hTERT启动子在肿瘤细胞中的靶向转录活性.方法用PCR方法克隆293细胞DNA hTERT 5'端上游旁侧序列长约1.1 kb的启动子片段,经测序无误后将其克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTERTp重组质粒,瞬时转染肺癌细胞A549、SPC-A-1、LTEPα-2、NCI-H446、YTMLC-9、GLC-82、95D、A2以及正常成纤维细胞MRC-5,检测荧光素酶活性.并用RT-PCR和TRAP -ELISA方法分析各细胞hTERT mRNA的表达及其端粒酶活性.结果琼脂糖电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1 kb,DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,位于hTERT基因转录起始位点上游1126 bp (-1126～-40),片段长度为1084 bp;采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功;hTERT mRNA和端粒酶活性在肺癌细胞中呈不同水平的表达,而正常细胞则均为阴性;瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子片段在所有检测的肺癌细胞中均有高低不同的转录活性, 在正常细胞MRC-5无转录活性.结论克隆的1084 bp大小的hTERT启动子片段在hTERTmRNA和端粒酶阳性的肺癌细胞中有特异性的转录活性, hTERT启动子可能作为靶向性基因治疗的调控元件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王艳萍	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	57	1105	17.0	31.0
2	陈晓禾	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	18	197	8.0	14.0
3	车国卫	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	143	1676	21.0	38.0
4	周清华	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	69	876	17.0	27.0
5	孙芝琳	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	14	101	6.0	9.0
6	唐小军	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	6	33	3.0	5.0
7	朱大兴	四川大学华西医院肺癌分子生物实验室	5	21	2.0	4.0