猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因的融合表达

• 作者: 于春梅 周斌 曹瑞兵 苏鑫铭 郑其升 陈勇军 陈溥言 高晓飞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合症病毒 GP5蛋白 ORF5基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 319-322
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 2806字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.03.004

摘要

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物,从重组质粒pMD-ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28 residues)和中部跨膜区(60 residues).改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和ORF5-2.将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析,ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达,表达量分别为12.2%和39%,证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量.经Western blot分析,融合蛋白具有一定的免疫学活性,表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大.