利用RNAi技术抑制结肠癌NRF2基因表达

• 作者: 张燕 朱强 李延青 杨晓云 袁俊华 郭玉婷
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: NRF2 服RNA干扰 基因表达 结肠癌
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1072-1077
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2006.10.006

摘要

目的 构建RNA干扰真核表达载体pSUPER-NRF2,并在结肠癌细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否受到抑制.方法 设计特异性针对NRF2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,分别构建重组载体并转染人结肠癌Caco-2细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光来监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48 h后G418筛选稳定表达的细胞.利用RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞NRF2 基因的表达.结果 成功构建RNAi真核表达载体.转染pEGFP-N1后48 h达转染效率高峰.瞬时及稳定转染pSUPER-NRF2-A2、B2重组质粒NRF2 mRNA的表达无差异;转染48 h后,pSUPER-NRF2-A1、B1可显著抑制NRF2 mRNA的表达;pSUPER-NRF2-B1稳定转染后,NRF2 mRNA的表达也显著降低.瞬时和稳定筛选后NRF2蛋白表达亦显著降低.结论 成功构建了NRF2的RNAi表达载体,可有效抑制靶基因表达,共转染带有筛选标记的pEGFP-N1质粒,筛选可获得低表达NRF2的稳定克隆,为进一步研究NRF2在结肠癌发生、发展中的作用提供了重要的实验材料.