诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究

• 作者: 刘广超 卢峰 张军 李淑莲 杜耀武 白慧玲 赵粤萍 都景芳 马远方
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 死亡受体5 细胞凋亡 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 632-636
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.07.015

摘要

目的研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体(McAb).方法以可溶性人死亡受体(death receptor,DR)5胞外段免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人DR5的McAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化McAb;夹心ELISA法测定McAb亚型;Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测McAb的特异性;流式细胞仪检测FITC-annexinV/PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化.结果获得1株杂交瘤细胞,其分泌的McAb命名为mDRA-6,为IgG1;其抗原表位类型为构象表位;其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应.mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用;经McAb mDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并导致Jurkat细胞中的DNA片段化.结论mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体,在以TRAIL/DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景.