猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及酶活性测定

• 作者: 唐家琪 李先富 潘秀珍 王长军 赵华梅 郭恒彬
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌2型 谷氨酸脱氢酶 GDH家族I NADP(H)-特异性GDH
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 22-25
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2
• 字数: 3182字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.01.005

摘要

目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性.方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性. 结果 PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成.结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长军	南京军区军事医学研究所流行病研究室	134	625	12.0	17.0
2	潘秀珍	南京师范大学生命科学学院	80	452	10.0	17.0
4	唐家琪	南京军区军事医学研究所流行病研究室	103	711	14.0	22.0
5	郭恒彬	南京军区军事医学研究所流行病研究室	49	362	11.0	17.0
8	李先富	南京军区军事医学研究所流行病研究室	43	140	7.0	9.0
9	赵华梅	南京师范大学生命科学学院	2	78	2.0	2.0