双重荧光标记法检测人视网膜色素上皮细胞吞噬的功能

• 作者: 孙昱昭 洪晶
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜色素上皮细胞 吞噬
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 42-46
• 页数: 5页
• 分类号: R77
• 字数: 3994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2006.01.013

摘要

目的:检测人视网膜色素上皮(human retinal pig-ment epithelium,HRPE)细胞特异性及非特异性吞噬动力学,比较二者的不同之处.方法:用双重荧光标记法检测HRPE细胞吞噬动力学,即分别用红色染料硫氰酸罗达明(sulforho-damine,SR)、绿色荧光染料异硫氰酸酯荧光素(FITC)标记HRPE细胞和视杆细胞外节膜盘(rodouter segments,ROS).用1×1010个/L的FITC-ROS及自发绿色荧光的乳胶微球(1eatex beads,LB)于37℃孵育培养的正常HRPE细胞,在孵育的不同时间(5min～48h)去除孵育物,终止吞噬反应.用配有特殊三通广谱吸收波长,长工作距离镜头的荧光显微镜实时,活体观察并记录结合及吞噬的数量.用扫描电镜及激光共聚焦扫描显微镜证明HRPE细胞对LB及ROS结合与吞噬.结果:孵育0.25h时ROS已结合于HRPE细胞表面,0.5h时可见极少数的ROS被HRPE细胞摄入细胞内;之后的孵育过程中被结合及被吞噬的ROS数目不断增加,至孵育18h对ROS的结合达到饱和,但摄入过程继续进行,至孵育24h,对ROS的吞噬达到饱和.当HRPE细胞与LB孵育时,至1.5h结合方启动,6h摄入开始;在观察的48h内被结合及被吞噬的LB数目随时间延长而呈线性增加.结论:HRPE细胞的特异性及非特异性吞噬动力学明显不同,HRPE细胞对ROS的结合及吞噬比其对LB的结合及吞噬发生得更早,而且结合及吞入过程均具有时间饱和性.