大鼠维生素D受体蛋白表达载体的构建及遗传性高钙尿性结石大鼠十二指肠维生素D受体cDNA序列分析

• 作者: 余虓 刘继红 叶章群 席启林 杨为民 王少刚 王涛 罗冬喜 陈志强
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 真核表达 维生素D受体 克隆
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1358-1360
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1001-9030.2006.11.027

摘要

目的 构建大鼠维生素D受体(VDR)蛋白表达载体,测定并分析遗传性高钙尿性结石(GHS)大鼠VDR cDNA序列.方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增含VDR蛋白编码基因序列,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1/Zero(+),对5只GHS大鼠和4只正常尿钙对照(NC)大鼠十二指肠VDR cDNA序列进行测序分析.结果 琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数目与目的片段大小一致.对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的VDR基因编码序列相同.5只GHS鼠和4只NC鼠肠VDR cDNA序列均有3个相同的位点不同于已公布的大鼠肠VDR cDNA序列:在256 bp位点:C取代G;569 bp位点:G代替A;1 658位点:A替代G.另外,GHS鼠在1 795 bp位点发生改变,G取代A,而NC鼠则无改变.结论 大鼠维生素D受体蛋白编码序列被成功地克隆至表达载pcDNA3.1/Zero(+)上.GHS大鼠基因编码区的序列组成同NC大鼠相一致,但GHS鼠1 795 bp位点的碱基改变未见于NC鼠.