APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

• 作者: 仲召阳 卿毅 张沁宏 李增鹏 杨宇馨 王东
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肿瘤 RNA干扰 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 专题报道:肿瘤分子病理和分子靶向治疗
• 页码范围: 97-100
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R73-36|R738.1
• 字数: 3049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.02.003

摘要

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%～95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.