RNAi抑制IEC-6细胞中ERp29表达

• 作者: 杨媛 王军平 王蒙 章波 粟永萍
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ERp29 RNAi IEC-6 转染 表达
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1135-1137
• 页数: 3页
• 分类号: Q503|Q782|Q786
• 字数: 3017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.11.001

摘要

目的构建抑制大鼠ERp29基因表达的重组质粒,并在IEC-6细胞中发挥作用.方法根据大鼠ERp29的基因序列,设计合成含有发夹结构的寡核苷酸片段,经退火形成双链后克隆至pAVU6+27载体质粒中,对阳性重组子进行酶切和测序鉴定后转染正常IEC-6细胞,通过PCR方法对siERp29干扰片段进行鉴定,并采用Western blot检测ERp29蛋白水平的表达变化.结果重组质粒经双酶切后,有目的条带出现,提示ERp29干扰片段已克隆至pAVU6+27载体质粒中,DNA测序结果显示插入序列与预先设计完全一致.重组质粒转染IEC-6细胞后经G418筛选,成功获得阳性克隆,Western blot结果显示ERp29的蛋白水平表达显著下降.结论成功构建ERp29基因RNA干扰表达质粒,并在IEC-6细胞中发挥抑制作用,这为深入研究该基因在电离辐射中的作用奠定了基础.