rhBMP-2m大规模制备纯化过程中使用尿素的分析

• 作者: 关露媛 张晓楠 王涛 秦云 赵玮钦 陈南春 陈苏民
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨形成蛋白2成熟肽 高密度发酵 大规模蛋白质纯化 尿素
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 746-750
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2006.06.019

摘要

为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体.洗涤后的包涵体中,rhBMP-2m占蛋白量的75.1%.为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,经SP-Sepharose FF柱和Q-Sepharose FF柱两步纯化.rhBMP-2m包涵体经pH6.5尿素溶解后,经SP-Sepharose FF柱纯化,蛋白纯度为91%;若rhBMP-2m在碱性尿素中作用时间超过48 h,再经Q-Sepharose FF柱纯化后,纯化产物中在还原性SDS-PAGE中会出现少量与rhBMP-2m二聚体大小接近的蛋白带,显示出碱性尿素对rhBMP-2m的共价修饰作用,会严重地影响rhBMP-2m的纯化效果和活性;若24 h内完成分离纯化则影响较小,纯化后rhBMP-2m单体的纯度达98%以上.本研究表明尿素适合rhBMP-2m包涵体的大规模纯化.文章对使用尿素的利弊进行了讨论,提出大规模制备蛋白质时最好避免在碱性环境使用高浓度尿素.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈苏民	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	100	695	11.0	23.0
2	陈南春	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	58	283	8.0	13.0
3	张晓楠	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	47	317	9.0	16.0
4	王涛	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	87	599	11.0	20.0
5	赵玮钦	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	5	19	3.0	4.0
6	秦云	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	8	57	4.0	7.0
7	关露媛	第四军医大学生物化学与分子生物教研室	1	3	1.0	1.0