Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白在急性缺氧性细胞损害中的表达调节机制研究

• 作者: YAN Shi-du 吴晓牧 张昆南 徐红薇 王朝东 胡国柱
• 来源期刊: 实用临床医学
• 学科: 生物学
• 关键词: Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白 细胞 缺氧 表达调节
• 年，卷（期）: 2006,（12）
• 所属期刊栏目: 基础与临床
• 页码范围: 1-4,8
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 2727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-8194.2006.12.001

摘要

目的:探讨Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白(ABAD)的基因表达调控机制及其对缺氧反应的分子生物学机理.方法:根据Genebank中包含ABAD基因全长序列的DNA序列设计引物,PCR扩增ABAD基因上游启动子区全长2055bp之片段,并将其亚克隆至荧光酶报告载体Luciferase pGL3中的NheI/SmaI位点,构建ABAD启动子-pGL3表达质粒(P-2055)及5′-端截短的ABAD启动子-pGL3表达载体(P-1453,P-128).用脂质体Lipofectmine 2000将1μg待转染的空pGL3表达载体DNA(阴性对照)及ABAD全长和5′截短启动子-pGL3表达质粒DNA(P-2055,P-1453, P-128)转染至对数生长的COS-1细胞中.细胞转染后48 h,收集细胞,裂解,提取蛋白,以Dual-luciferase reporter 系统为底物并采用荧光测定仪测定荧光酶活性.采用相对活性方法比较全长和截短的ABAD启动子活性,以确定核心启动子序列.采用缺氧箱分别诱导细胞缺氧后,测定ABAD核心启动子序列的活性改变.结果:ABAD全长启动子-pGL3表达质粒(P-2055)的荧光酶活性较pGL3空表达载体高300倍以上(P＜0.001).该全长启动子截短至-128 bp(P-128)时,活性仍为全长序列的105%,而将该128bp序列去除后,其活性几乎全部消失.ABAD核心启动子序列(P-128)经缺氧处理1、4、8、16 h后,其活性分别降为正常氧状态的(64.5±1.7)%、(51.4±1.6)%、(17.8±1.1)%、(8.3±0.3)%,各缺氧时间点相对活性与正常氧状态相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:ABAD上游128 bp为该基因的核心启动子序列,决定了ABAD的表达活性.该启动子对缺氧高度敏感,其对缺氧的反应是ABAD缺氧性改变的主要分子机理.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴晓牧	江西省人民医院神经内科	171	1029	15.0	24.0
2	张昆南	江西省人民医院神经内科	110	588	13.0	17.0
3	胡国柱	江西省人民医院临床医学研究所	36	159	7.0	10.0
4	徐红薇	哈尔滨医科大学免疫学教研室	15	60	4.0	7.0
5	王朝东	江西省人民医院神经内科	11	63	5.0	7.0