Ⅰ型胰岛素样生长因子重组真核表达载体的构建及在烫伤大鼠皮肤中的表达

• 作者: 杨磊 王甲汉 王颖 高建华
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 伤口愈合 基因疗法 胰岛素样生长因子Ⅰ 成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 瘢痕及烧伤整形相关基础研究
• 页码范围: 89-91,插图20-3
• 页数: 4页
• 分类号: R619.6
• 字数: 5104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.20.040

摘要

目的:构建Ⅰ型胰岛素样生长因子重组真核表达载体pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子,并观察其在烫伤大鼠皮肤中的表达情况.方法:实验于2003-07/12在解放军第一军医大学热带卫生学系实验室完成.利用原核表达质粒pUChIGF-Ⅰ,通过分子克隆技术扩增Ⅰ型胰岛素样生长因子基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子.取20只Wistar大鼠,全麻后背部浸入95℃水浴锅中,烫伤12 s,造成30%Ⅲ度烫伤,烫伤后随机分为两组(n=10),即cDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子组及pcDNA3.1组.①pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子组:烫伤后当天及第1,2,3,4周后于大鼠左后背部创面边缘(距创面边缘0.5 cm)皮下注射脂质体和重组质粒的混合物192μL[3.6μg pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子(2μL)+10μL脂质体+180 μL生理盐水].②pcDNA3.1组:注射时间和方法同前,脂质体和质粒混合物为3.0μg pcDNA3.1(2μL)+10μL脂质体+180μL生理盐水.伤后5周断头处死大鼠,取注射点附近皮肤,应用免疫组化方法检测Ⅰ型胰岛素样生长因子基因的表达情况.结果:20只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①大鼠重组质粒经酶切鉴定与预期结果一致,DNA测序结果表明Ⅰ型胰岛素样生长因子基因已分别正确插入到pcDNA3.1质粒,提示成功构建了重组真核表达载体.②pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子组大鼠皮肤组织中Ⅰ型胰岛素样生长因子呈现强阳性表达,pcDNA3.1组大鼠呈表达缺失或弱阳性表达.结论:应用分子克隆技术可以成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1/Ⅰ型胰岛素样生长因子,Ⅰ型胰岛素样生长因子在烫伤大鼠皮肤中呈阳性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高建华	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	141	942	15.0	21.0
2	王颖	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	37	131	7.0	9.0
3	杨磊	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	55	328	10.0	14.0
4	王甲汉	南方医科大学南方医院烧伤整形中心	83	597	12.0	18.0