表达禽流感病毒特异性siRNA分子减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

• 作者: 刘文博 刘秀梵 吴艳涛 张小荣 曹永忠 焦新安 王海燕
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 减毒鼠伤寒沙门氏菌 siRNA H5亚型禽流感病毒 递送系统 保护力
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 125-129
• 页数: 5页
• 分类号: S858.3
• 字数: 3214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2007.02.008

摘要

为了寻找一种新的短干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)片段的表达和递送系统,并进行评价,根据禽流感病毒核苷酸序列,设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子,人工合成相应DNA片段,退火后形成双链,与阴性对照片段分别连接到构建的pSIREN-ASD ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,测序鉴定证实获得了阳性质粒,分别命名为PAZ-NP、PAZ-PA、PAZ-HA和PAZ-NC,1ng的质粒可以完全抑制50个PFU的禽流感病毒在MDCK细胞上的复制,细胞不产生任何病变,细胞上清的血凝效价为2°,而对照组细胞在病毒感染36～48h后细胞变圆、死亡、脱落,其细胞上清的血凝效价可达24.将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550得到重组沙门氏菌X4550(PAZ-NP)、X4550(PAZ-PA)、X4550(PAZ-HA)和X4550(PAZ-NC).对4日龄雏鸡口服1×109菌落形成单位(CFU)的重组菌后第1d、7d、15d用105ELD50的H5亚型AIV进行攻毒,最后一次攻毒后观察15d,实验结束时采泄殖腔棉拭子对存活鸡进行病毒分离.结果表明,表达不同的siRNA分子对雏鸡有一定的保护力,保护率为27%～50%不等,存活鸡泄殖腔棉拭子未分离到病毒,说明重组减毒沙门氏菌携带质粒在体内产生的siRNA能够对机体产生一定保护力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	焦新安	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	249	2602	25.0	38.0
2	张小荣	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	73	540	14.0	20.0
3	吴艳涛	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	105	1064	18.0	27.0
4	王海燕	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	20	97	5.0	9.0
5	刘文博	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	67	568	14.0	21.0
6	曹永忠	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	39	133	7.0	9.0