人内质网分子伴侣BiP的克隆、表达及其在RA患者血清抗体检测中的作用

• 作者: 何文智 张惠勇 曾令文 李想 陈巧林 雷静
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 类风湿关节炎 内质网分子伴侣 表达纯化 抗体检测
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 专家述评
• 页码范围: 104-108
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2007.02.004

摘要

以类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜组织文库cDNA为模板,用PCR方法扩增得到1 965 bp人内质网分子伴侣BiP的全长cDNA,将其克隆入OmicsLinkTM表达载体pReceiver-B01a,构建重组表达质粒pReceiver-B01a-BiP.重组表达质粒导入大肠杆菌BL-21(DE3)菌株中诱导表达目的蛋白,表达产物以Ni+-NTA agarose层析柱纯化.SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)分析发现,表达产物以可溶性蛋白和包涵体形式共同存在,表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%.相对分子质量约为80 000,纯度达到电泳级.经免疫印迹法鉴定,获得的BiP重组蛋白可以与RA患者血清反应,检测的抗BiP抗体在RA患者血清中的阳性率为75.4%(49/65),明显高于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者14.6%(7/48)、原发性干燥综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)患者7.3%(4/55)及正常人0%(0/71)(P＜0.01).表明,经原核表达获得的BiP全长蛋白,RA患者血清抗体可以很好结合,有望应用于临床血清学诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈巧林	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	6	12	2.0	3.0
2	何文智	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	2	5	1.0	2.0
3	李想	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	28	91	6.0	8.0
4	雷静	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	12	69	5.0	8.0
5	张惠勇	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	1	4	1.0	1.0
6	曾令文	中国科学院广州生物医药与健康研究院分子诊断研究室	6	5	1.0	2.0