多光子激光扫描成像技术对活细胞内淀粉样前体蛋白裂解和β-淀粉样蛋白生成的观察

• 作者: 张智红 张苏明 李晓晴 杨华静
• 来源期刊: 神经科学通报（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 淀粉样前体蛋白 β-淀粉样蛋白 β裂解 荧光共振能量转移
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 页码范围: 256-262
• 页数: 7页
• 分类号: R742
• 字数: 1565字
• 语种: 英文

摘要

目的 在活细胞内探究淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的裂解和β-淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)的生成机制.方法 利用PCR扩增CFP(编码蓝色荧光蛋白),YFP(编码黄色荧光蛋白)和C99(编码APP最后99个氨基酸)三片段.含有54个碱基(编码APP中间18个氨基酸)的片段54bp由生物公司合成.CFP,YFP,54bp和C99四个片段连入载体质粒pcDNA3.0得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP和pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99.将这两个重组质粒分别瞬时转染SH-SY5Y细胞.利用多光子激光扫描显微镜观察融合基因的表达,荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测APP的β裂解.免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察Aβ的生成.MTT检测转染细胞活性.结果 (1)限制性内切酶双酶切消化和测序分析鉴定重组质粒序列完全正确.(2)转染细胞内可以观察到蓝色和黄色荧光.(3)在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP转染细胞中存在FRET现象;在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染细胞中观察不到FRET现象.(4)免疫细胞化学和多光子激光扫描显微镜观察到在pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP-C99转染的细胞中有Ap的生成.(5)Aβ的沉积广泛分布于细胞内.(6)随着Aβ在细胞内的产生和聚集,细胞的活性逐步下降.结论 C99对于APP的β裂解非常重要.早期Aβ首先在细胞内生成并在细胞内形成广泛沉积.细胞内聚集的Aβ会影响细胞活性,带来不利结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张苏明	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科	315	1877	20.0	27.0
2	李晓晴	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科	35	94	6.0	8.0
3	杨华静	华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科	15	41	4.0	6.0
4	张智红	华中科技大学生物医学光子学教育部重点实验室	16	83	6.0	9.0