裂解性复制诱导产生可视化重组Epstein Barr病毒

• 作者: 卢建红 周艳宏 周鸣 唐珂 唐运莲 彭淑平 曹利 李小玲 李桂源 武明花 黄琛
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 裂解性复制 重组EB病毒 可视化 基因组
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 418-424
• 页数: 7页
• 分类号: R739.63
• 字数: 5897字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2007.04.014

摘要

为了在病毒的整个基因组中研究基因的功能,分析基因与基因之间的相互作用,含有整个野生型EB病毒(EBV)基因组的BAC-EBV质粒(p2089),首先被转染EBV阴性的HEK293细胞,经潮霉素筛选建立了HEK293/p2089稳定细胞系.再构建pcDNA3.1(+)/BZLF1和pcDNA3.1(+)/BALF4真核表达质粒,共转染至HEK293/p2089细胞内,诱导EBV裂解性复制产生可视化的重组EBV颗粒.重组EBV颗粒感染Raji细胞,在倒置荧光显微镜下和流式细胞仪记数GFP阳性细胞,根据这些"绿色Raji单位"确定病毒的滴度.在国内首次建立这种以细菌人工染色体(BAC)为基础的EBV感染性克隆技术,将允许对EB病毒基因组中任何基因的任何遗传修饰,为在整个基因组中对EB病毒基因功能的研究奠定了基础,也为对EBV与其相关的肿瘤如鼻咽癌发生机理的研究建立了新的技术平台.