濒危植物夏蜡梅ISSR扩增条件的优化

• 作者: 李钧敏 金则新
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 夏蜡梅 ISSR 优化 遗传多样性
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: Q94
• 字数: 3715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5102.2007.01.013

摘要

为了确保ISSR分析结果的可靠性和重复性,有必要进行ISSR-PCR反应体系的优化.以濒危植物夏蜡梅的基因组DNA为研究对象,利用单因素试验,测试了ISSR-PCR反应体系中镁离子,dNTP,模板DNA含量,Taq DNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度、甘油浓度等7种因素对反应结果的影响,经过优化实验,建立了夏蜡梅ISSR-PCR最佳反应体系:10 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol·L-1 Tris·HCl pH9.0,50 mmol·L-1 KCl, 0.1%Triton X-100),1.5 mmol·L-1 MgCl2,0.75U Taq酶(上海华美公司),20 ng模板DNA,6pmol引物(上海Sangon公司);dATP、dCTP 、dGTP 、dTTP 各0.15 mmol·L-1.利用优化反应体系从100个ISSR引物中共筛选出12个稳定性好、重复性高的引物,对10个居群共200个夏蜡梅个体的DNA进行扩增,共扩增出156个条带,其中多态条带为114个,总的多态位点百分率为73.08%.各居群的多态位点百分率有较大差异,平均为23.65%.夏蜡梅ISSR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究夏蜡梅的遗传多样性奠定了良好的基础.