用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化

• 作者: 刘振岭 李建军 柯从玉 耿信笃
• 来源期刊: 西北大学学报(自然科学版)
• 学科: 化学
• 关键词: 蛋白折叠 分子构象 疏水相互作用色谱 基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS) 计量置换 α-糜蛋白酶(α-Chy) 折叠中间体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 纪念西北大学建校105周年征文
• 页码范围: 879-885
• 页数: 7页
• 分类号: O658
• 字数: 4319字
• 语种: 中文

摘要

目的 用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶(α-Chy)及其折叠中间体的分子构象变化.方法 用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离,对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(HPHIC-MALDI-TOF-MS)进行检测,并用紫外和荧光光谱对其分子构象变化进行了验证.结果 确认了脲变α-Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在,发现二者的Z值均随脲浓度的增加而减小.在脲浓度范围为0～3.0 mol·L-1时,α-Chy折叠中间体的Z值远小于天然α-Chy的Z值,而脲浓度为4.0 mol·L-1和5.0 mol·L-1时,折叠中间体的Z值稍大于天然α-Chy的Z值.结论 α-Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化,而天然α-Chy的分子构象随脲浓度呈不连续性变化.进一步发现α-Chy的Z值与其复性回收率之间存在着相似的变化规律.中间体的保留机理服从计量置换保留理论(SDT-R),且得到的参数Z可用来表征天然α-Chy和其折叠中间体的分子构象变化.