pMSCVpuro-BIG-3诱导人骨髓基质干细胞向成骨方向分化的实验研究

• 作者: 保毅 刘民 吕荣 孟国林 李丹 李立文 毕龙 白雪东 胡蕴玉 魏义勇
• 来源期刊: 中国骨肿瘤骨病
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白 BIG-3 逆转录病毒 骨髓基质干细胞
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 328-331
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-252X.2007.06.003

摘要

目的 制备重组BIG-3(BMP-2 induced gene 3 Kb,BIG-3)逆转录病毒并初步探讨其对人骨髓基质细胞生物学功能的影响.方法将pGEX 4T-2-BIG-3和pMSCVpuro双酶切,回收凝胶,行连接反应,连接产物转化DH5 α感受态细胞,提取质粒,采用菌液PCR方法鉴定所提质粒,以此质粒转染PT67细胞制备重组BIG-3逆转录病毒并用PCR法鉴定;培养人骨髓基质细胞,待其达60%汇合时加入含重组BIG-3逆转录病毒的细胞培养上清,嘌罗霉素筛选,筛选持续10d后所得细胞行碱性磷酸酶染色和钙结节染色.结果 重组质粒pMSCVpuro-BIG-3的菌液PCR法和重组BIG-3逆转录病毒的PCR法电泳图片均在1Kb处有清晰的单一条带,符合预期目的,碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈强阳性.结论 成功制备BIG-3逆转录病毒,BIG-3可使人骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化.