罗非鱼微囊藻毒素去毒相关基因克隆与活体表达研究

• 作者: 廖婉琴 梁旭方 王琳 雷腊梅 韩博平
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 罗非鱼 可溶性谷胱甘肽S-转移酶 谷胱甘肽过氧化物酶 解偶联蛋白2 分子克隆 活体诱导表达 微囊藻毒素
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 页码范围: 788-798
• 页数: 11页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 7602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3207.2007.06.004

摘要

可溶性谷胱甘肽S-转移酶(Soluble glutathione S-transferase, sGST)催化微囊藻毒素(Microcystins,MCs)与还原型谷胱甘肽(GSH)的加合去毒代谢过程,谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPX)为sGST的去毒反应提供GSH,解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2, UCP2)则可抑制微囊藻毒素诱发活性氧导致的肝细胞凋亡.本研究从罗非鱼肝脏通过简并引物克隆sGST、GPX与UCP2基因cDNA核心序列,并应用5'RACE和3'RACE技术分别扩增罗非鱼肝脏sGST基因cDNA序列5'末端和3'末端序列而获得其cDNA全序列.罗非鱼肝脏sGST基因cDNA全序列长861 bp, 其中5'非翻译区(5'-UTR)为25 bp,3'非翻译区(3'-UTR)为167 bp,开放阅读框(ORF)为669 bp,编码222个氨基酸,包含脊椎动物完整sGST的2个功能域:N-末端功能域(GSH结合位点)和C-末端功能域(底物结合位点).罗非鱼sGST与真鲷、条石鲷(Oplegnathus fasciatus)、斑马鱼同源性较高,达到64.3%-78.5%,而与人、大鼠、小鼠、牛、猪、鸡差异较大,氨基酸同源性为48.2%-55.9%.罗非鱼肝脏GPX、UCP2基因cDNA核心序列长280 bp、776 bp,分别编码92、258个氨基酸.罗非鱼GPX与条石鲷、虹鳟、斑马鱼、人、大鼠、小鼠、牛、猪GPX同源性均较高,达到69.6%-85.9%.罗非鱼UCP2与真鲷、斑马鱼、鲤鱼、欧洲白鲑(Leuciscus cephalus)、草鱼、人、大鼠、小鼠UCP2同源性更高,达到71.8%-93.8%.通过对罗非鱼(5-8 g)活体腹腔注射亚致死量MC-LR(50 μg/kg bwt),发现微囊藻毒素对罗非鱼肝脏sGST基因表达有显著的诱导作用(p< 0.05),注射微囊藻毒素24h后sGST基因mRNA表达水平上调80%.注射微囊藻毒素24h后,虽然罗非鱼肝脏GPX与UCP2基因mRNA表达水平亦出现明显的升高趋势,但两者均未出现显著性的变化(p >0.05).本研究从基因表达调控的角度证实,罗非鱼肝脏sGST在微囊藻毒素去毒过程中可能发挥关键作用,同时也说明罗非鱼肝脏GPX、UCP2基因可能在微囊藻去毒过程中发挥协同作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩博平	暨南大学生命科学技术学院	192	4189	32.0	56.0
2	梁旭方	暨南大学生命科学技术学院	96	622	13.0	17.0
3	廖婉琴	暨南大学生命科学技术学院	14	104	7.0	10.0
4	王琳	暨南大学生命科学技术学院	55	376	11.0	16.0
5	雷腊梅	暨南大学生命科学技术学院	54	647	15.0	23.0