人类不同类型细胞中X-盒结合蛋白1转录活性研究

• 作者: 唐勇 宋方洲 张静 李婧 郭风劲
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 医学
• 关键词: 转录因子 XBP1启动子 CAT ELISA 转录调控
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 790-799
• 页数: 10页
• 分类号: R3
• 字数: 1372字
• 语种: 中文

摘要

人类X-盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)作为一种重要的转录因子,在细胞中涉及了广泛的信号调控过程.为进一步研究XBP1的生物学功能,首先利用生物信息学技术确定XBP1基因的启动子区域和2个缺失突变体的基因序列,聚合酶链反应扩增XBP1启动子和2个缺失突变体的基因序列,分别克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建3个报告载体p1-XBP1p、p2-XBP1p和p3-XBP1p,确定启动子活性最强的序列,并以该序列分别转染正常人肝细胞L02、人肝母细胞瘤细胞HepG2、人肝癌细胞SMMC-7721、人类红白血病细胞K562、人皮肤成纤维细胞HSF和人贮脂细胞LipocyteIto Cell 6种不同类型的细胞后(FuGENE 6transfection reagents),CAT-ELISA方法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)在不同细胞系中的表达活性.每一组CAT结果反应了XBP1启动子转录活性的大小,其中p3-XBP1p在HepG2细胞中活性最强,是pCAT3-Basic的12.4倍,其次是K562和SMMC-7721,分别是10.9倍和10.0倍;在L02细胞中CAT酶活性低于上述3种异常细胞,在HSF和Ito细胞中CAT酶活性低或没有活性.运用适时荧光PCR方法和免疫印迹分别从mRNA水平和蛋白水平检测了XBP1在不同细胞中的表达情况,结果均显示XBP1在HepG2、K562和SMMC-7721细胞中的转录和表达强于L02、HSF和Ito细胞,在HSF细胞和L02细胞中转录和表达较低,在Ito细胞中几乎检测不到XBP1的表达,与CAT-ELISA检测结果一致.因此,XBP1启动子的转录活性在不同细胞中是具有差异的,而XBP1启动子转录活性的大小直接调控下游基因XBP1的表达,导致不同细胞中XBP1的表达丰度也不相同,XBP1启动子的转录活性和表达与细胞类型、细胞周期和组织特异性密切相关.本研究发现XBP1启动子的ATG上游-227bp～66bp区域与XBP1的转录活性密切相关,属于XBP1启动子的核心区域;进一步比较XBP1基因核心启动子区在不同细胞中转录活性的差别和XBP1基因表达丰度的差异,为揭示真核细胞中XBP1的转录调控机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	36	142	7.0	11.0
5	宋方洲	重庆医科大学生物化学及分子生物学教研室	88	309	9.0	12.0
6	张静	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	86	354	9.0	14.0
7	唐勇	重庆医科大学基础医学研究所	31	142	7.0	11.0
8	李婧	重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室	5	23	2.0	4.0