家蝇幼虫抗菌肽Attacin基因的克隆表达及抑菌生物学活性

• 作者: 徐建华 朱家勇 许琴英 金小宝
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蝇 抗菌肽Attacin 基因克隆 生物信息学分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: Q5
• 字数: 380字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2007.01.005

摘要

目的 克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因,构建原核融合表达载体,建立Attacin体内抗菌活性检测系统,优化表达和纯化Attacin目的蛋白,并初步研究其抗菌生物学功能.方法 以pUCm-T/Attacin重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Attacin编码区序列,分别克隆至原核表达载体pET30a(+)和pGEX-4T-1,构建原核重组质粒,转化大肠埃希菌,表达重组Attacin蛋白,并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性.利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin,SDS-PAGE进行纯度分析,琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性.结果 pET30a(a+)/Attacin和pGEX-4T-1/Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后,以IPTG诱导表达,与未诱导对照相比,含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制,从pET30a(+)/Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白,而从pGEX-4T-1/Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白.SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致,琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性.结论 Attacin基因在原核系统中成功表达,并且纯化后具有抑菌活性,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱家勇	广东药学院生命科学与生物技术研究中心	121	797	13.0	22.0
2	金小宝	广东药学院生命科学与生物技术研究中心	100	490	12.0	15.0
3	许琴英	广东医学院病原生物学教研室	18	107	8.0	9.0
4	徐建华	广州中医药大学第二附属医院检验科	10	52	5.0	7.0