摘要:
目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang1)对胃癌细胞MGC-803增殖与凋亡的影响,研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法:以人胚肾293细胞对重组质粒Ad-Ang1和Ad-GFP进行包装、扩增和纯化后转导MGC-803细胞,应用MTT比色法分析Ang1对该胃癌细胞增殖的影响,通过流式细胞仪分析血浆Ang1对胃癌细胞凋亡的影响,并通过免疫组织化学法检测Ang1及其受体Tie-2的表达情况.结果:成功包装、扩增及纯化了重组腺病毒Ad-Ang1及对照病毒Ad-GFP,其感染滴度分别为2.0×1012和1.15×1013 PFU/L.当感染复数(MOI)为20时转导率即接近100%,而细胞形态无明显改变.MTT结果显示,24,48和72 h时Ad-Ang1组吸光度均明显高于Ad-GFP组及对照组(Ad-GFP vs Ad-Ang1:24 h,t=16.32,P<0.0001;48 h,t=10.47,P=0.0005:72 h,t=24.59,P<0.0001.对照组vs Ad-Ang1:24 h,t=10.54,P=0.0005;48 h,t=13.92,P=0.0002;72 h,t=22.46,P<0.0001),Ad-GFP组与对照组相比无差别;流式细胞仪检测显示,对照组、Ad-GFP组和Ad-Ang1组的凋亡率(%)分别为:9.90±0.62,10.07±1.27和4.17±0.35:免疫组化显示,3组细胞均有不同程度Ang-1及其受体Tie-2的表达,且其阳性表达率在Ang1基因转染组(Ang-1:99.2±0.8;Tie-2:85.4±1.8)显著高于对照组(Ang-1:51.0±2.7;Tie-2:30.8±1.5)和GFP组(Ang-1:51.4±1.5;Tie-2:32.4±2.3)(P<0.0001).结论:Ang1能显著促进人胃癌细胞MGC-803体外增殖,抑制血浆饥饿时的凋亡.