PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响

• 作者: 周斌 曹瑞兵 李鹏 毕志香 牛明福 郑其升 陈德胜 陈溥言
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 基因改造 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 33-39
• 页数: 7页
• 分类号: Q754
• 字数: 6498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2007.01.006

摘要

为了提高PRRSV ORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因.在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的ORF5(MORF5)与ORF6基因的真核表达质粒pcDNA-M5A-6A.经Western-blot与IFA验证真核质粒的体外表达后,免疫6周龄Balb/c小鼠,利用微量中和试验检测免疫后的中和抗体,利用MTT法检测免疫后淋巴细胞的增生情况,并与未改造ORF5基因真核表达质粒pcDNA-5A-6A、弱毒疫苗以及灭活疫苗的免疫效果进行比较.结果表明,pcDNA-M5A-6A不但能够刺激免疫小鼠在较短的时间内产生更高水平的中和抗体,而且可以诱导产生更强烈的T淋巴细胞增殖反应.所构建的共表达PRRSV改造的ORF5基因与ORF6基因的DNA疫苗pcDNA-M5A-6A,能够较好的诱发小鼠产生较高的特异性针对PRRSV的中和抗体和细胞免疫应答,为研究能够更好地防制PRRSV的新型疫苗提供了新的思路.