蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测

• 作者: 周长林 戴红梅 方宏清 李招发 李玉玲 汤国营 陈惠鹏 黄金路
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛇毒金属蛋白酶 Alfimeprase 包涵体 纤维蛋白 纤维蛋白原
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 409-411
• 页数: 3页
• 分类号: Q78|Q556.9
• 字数: 3440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.03.014

摘要

目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase.方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoRⅠ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性.结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性.结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物.