肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷类抗生素基因aac(3)-Ⅰ的改构与功能

• 作者: 吕建新 季敬璋 彭颖 明镇寰 查长森 王震 邹立林 陈云波
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: aac(3)-Ⅰ 易错PCR 最低抑菌浓度
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 535-538
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3345字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2007.04.016

摘要

研究氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅰ碱基变异与功能的关系.构建表达载体pET28a-aac(3)-Ⅰ,转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),筛选到阳性克隆送测序.然后在体外对aac(3)-Ⅰ基因进行易错PCR改造,筛选到一株阳性克隆测序后发现7处碱基变异,其中C272T、T373C引发了氨基酸的变异,分别对应:Ser91Phe、Tyr125His.以琼脂稀释法检测不同克隆的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC).实验结果表明变异株MIC较突变前下降64倍(庆大霉素)、4倍(阿米卡星)、8倍(依替米星).为进一步了解和阐明耐药酶AAC(3)-Ⅰ与底物的作用机制打下基础.