基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取       
摘要:
目的:如何便捷有效地获取种子细胞是构建组织工程皮肤、角膜、血管等成功与否的关键,实验对人胎儿脐带内皮细胞和平滑肌细胞的分离、纯化、培养扩增技术进行探讨.方法:实验于2006-11在暨南大学医学院完成.①实验材料:剖宫产正常胎儿脐带由暨南大学第一临床学院提供,产妇均知情同意.②实验方法:配制培养液,A液为在M199培养液中加入20%胎牛血清、20 mg/L肝素、10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,B液为在M199培养基中加入10%胎牛血清、250 mg/L G418.取脐带15~20 cm,采用胶原酶"灌注消化法"获取脐带内皮细胞制成悬液,静置0.5 h后利用成纤维细胞短时间内贴壁的特点,把尚未贴壁细胞吸出重新接种于含有A液的培养瓶,初步去除部分成纤维细胞,细胞贴壁24 h后将培养液换为B液,继续培养3 d,去除成纤维细胞,然后再用A液扩大培养.从消化完脐静脉内皮细胞的脐带中剥取脐动脉,刮除内皮细胞,将血管条剪成小块均匀贴于培养瓶底,培养瓶内加入含20%小牛血清的DMEM培养液2 mL,缓慢竖直培养瓶,以培养液刚未浸没培养块为最佳,放入37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱内干涸8 h后,将培养瓶轻轻翻转,使植块刚浸入培养液中,绝对静置3 d,以后每3 d换液1次,待植块周围生长晕的细胞融合成片时,即可传代,传代后DMEM培养液的血清浓度由原来的20%改为5%,且在培养液中加入0.2 L肝素.③实验评估:通过倒置相差显微镜观察细胞生长情况,分别以第Ⅷ因子、α-肌动蛋白免疫组织化学染色法鉴定内皮细胞和平滑肌细胞.结果:①内皮细胞的生长观察:接种24 h后,镜下可见刚贴壁的细胞呈圆形,逐渐转变为多角形或梭形,胞间可见有成纤维细胞混杂,加入B液3 d后成纤维细胞逐渐死亡.传代细胞呈"铺路石"样,细胞周围特别是近胞核处可见明显光晕,为典型的内皮细胞生长特点.②内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原的检测:胞浆丰富且有棕黄色颗粒,细胞核不着色,呈阳性反应.③平滑肌细胞的生长观察:镜下组织块贴壁后5~7 d可见有少数细胞从植块边缘游出,第10~15天植块周围形成明显的细胞生长晕,细胞呈长梭形、带状或三角状,有1~4个细胞核,可见半透明颗粒,第20~25天细胞密集、平行排列,形成"峰谷样"结构,是平滑肌细胞的特征性生长表现.④平滑肌细胞特异性α-肌动蛋白单克隆抗体检测:胞浆内可见棕黄色细丝,为特异性α-平滑肌肌动蛋白,细胞核不着色.结论:以胎儿脐带作为种子细胞的来源,成功分离后通过调节培养液的成分,既能排除成纤维细胞的污染又可以令内皮细胞和平滑肌细胞快速增殖.
推荐文章
血管平滑肌细胞对联合培养内皮祖细胞黏附、增殖与形态的影响
联合培养
内皮祖细胞
血管平滑肌细胞
粘附
增殖
分化
大鼠细小动脉平滑肌细胞分离培养的新方法
平滑骨细胞
细胞培养
大鼠
鸡胚肺动脉内皮细胞与平滑肌细胞的分离培养及鉴定
鸡胚
肺动脉
内皮细胞
平滑肌细胞
培养
免疫组化
鉴定
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数  
(/次)
(/年)
文献信息
篇名 人脐带内皮细胞与平滑肌细胞的分离培养特照
来源期刊 中国组织工程研究与临床康复 学科 医学
关键词 内皮细胞 平滑肌细胞 优化培养 组织工程血管
年,卷(期) 2007,(37) 所属期刊栏目 干细胞实验技术方法
研究方向 页码范围 7397-7400
页数 4页 分类号 R394.2
字数 5474字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.37.021
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 黄华梅 暨南大学医学院形态学实验中心 19 85 5.0 8.0
2 谢德明 暨南大学生物医学工程系 40 350 11.0 17.0
3 罗洁芳 暨南大学第一临床学院手术室 3 12 2.0 3.0
传播情况
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献  (55)
共引文献  (26)
参考文献  (17)
节点文献
引证文献  (3)
同被引文献  (3)
二级引证文献  (2)
1978(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
1982(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1984(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1986(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
1989(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1990(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1991(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1992(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1993(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1994(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
1995(3)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(2)
1996(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1997(4)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(4)
1998(5)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(5)
1999(6)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(5)
2000(5)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(4)
2001(5)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(5)
2002(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2003(9)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(9)
2004(8)
  • 参考文献(2)
  • 二级参考文献(6)
2005(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2006(8)
  • 参考文献(8)
  • 二级参考文献(0)
2007(3)
  • 参考文献(3)
  • 二级参考文献(0)
2007(3)
  • 参考文献(3)
  • 二级参考文献(0)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(0)
2010(1)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(0)
2014(2)
  • 引证文献(2)
  • 二级引证文献(0)
2016(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
2019(1)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(1)
研究主题发展历程
节点文献
内皮细胞
平滑肌细胞
优化培养
组织工程血管
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国组织工程研究
旬刊
2095-4344
21-1581/R
大16开
沈阳浑南新区10002信箱
8-584
1997
chi
出版文献量(篇)
55677
总下载数(次)
80
总被引数(次)
337465
  • 期刊分类
  • 期刊(年)
  • 期刊(期)
  • 期刊推荐
中国组织工程研究2007年第9期 中国组织工程研究2007年第8期 中国组织工程研究2007年第7期 中国组织工程研究2007年第6期 中国组织工程研究2007年第52期 中国组织工程研究2007年第51期 中国组织工程研究2007年第50期 中国组织工程研究2007年第5期 中国组织工程研究2007年第49期 中国组织工程研究2007年第48期 中国组织工程研究2007年第47期 中国组织工程研究2007年第46期 中国组织工程研究2007年第45期 中国组织工程研究2007年第44期 中国组织工程研究2007年第43期 中国组织工程研究2007年第42期 中国组织工程研究2007年第41期 中国组织工程研究2007年第40期 中国组织工程研究2007年第4期 中国组织工程研究2007年第39期 中国组织工程研究2007年第38期 中国组织工程研究2007年第37期 中国组织工程研究2007年第36期 中国组织工程研究2007年第35期 中国组织工程研究2007年第34期 中国组织工程研究2007年第33期 中国组织工程研究2007年第32期 中国组织工程研究2007年第31期 中国组织工程研究2007年第30期 中国组织工程研究2007年第3期 中国组织工程研究2007年第29期 中国组织工程研究2007年第28期 中国组织工程研究2007年第27期 中国组织工程研究2007年第26期 中国组织工程研究2007年第25期 中国组织工程研究2007年第24期 中国组织工程研究2007年第23期 中国组织工程研究2007年第22期 中国组织工程研究2007年第21期 中国组织工程研究2007年第20期 中国组织工程研究2007年第2期 中国组织工程研究2007年第19期 中国组织工程研究2007年第18期 中国组织工程研究2007年第17期 中国组织工程研究2007年第16期 中国组织工程研究2007年第15期 中国组织工程研究2007年第14期 中国组织工程研究2007年第13期 中国组织工程研究2007年第12期 中国组织工程研究2007年第11期 中国组织工程研究2007年第10期 中国组织工程研究2007年第1期
论文1v1指导