人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化

• 作者: 张连杰 马振华 马艳琴
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 人脐静脉血管内皮细胞 胶原酶消化法 姬姆萨染色 免疫荧光技术
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 285-289
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1
• 语种: 中文

摘要

为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系.分离脐静脉并插管,用0.1％的Ⅱ型胶原酶灌注消化分离内皮细胞.M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5％CO2培养.待细胞铺满80％时,0.25％胰酶-EDTA消化传代培养.倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,姬姆萨染色法鉴定内皮细胞的形态,vWF因子相关抗原免疫荧光法鉴定内皮细胞.比较不同胶原酶消化时间、不同接种密度、不同胰酶消化时间、不同培养基组分对细胞得率、形态和纯度的影响.结果表明,原代培养时,Ⅱ型胶原酶最佳消化时间为15 min,最佳接神密度为1×106 mL-1;传代培养时,胰酶最佳消化时间为2min.倒置显微镜下观察和姬姆萨染色结果显示,贴壁内皮细胞呈长梭形,且呈单层铺路石状排列.免疫荧光检测结果表明,细胞胞浆呈绿色荧光,为vWF因子阳性细胞,DAPI衬染细胞核呈蓝色,显示内皮细胞纯度接近100％.本实验成功建立了HUVEC原代分离培养的优化体系,纯度高、活力好,为后续研究做好了准备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马艳琴	山西农业大学生命科学学院	27	76	4.0	8.0
2	马振华	山西农业大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0